[二苯胺鉴定dna的原理]二苯胺鉴定dna

2018-02-05 自我鉴定

实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。 当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

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DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,其反应如下图。蓝色化合物在595nm处有最大吸收,且DNA在40µg ~400µg范围内时,吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。

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甲基绿能把DNA染成绿色,为什么在DNA粗提取与鉴定试验中则用二苯胺鉴定?带着这个问题我上网查资料,经过我反复的思考,哈哈.....终于想明白了。我们在观察DNA、RNA的分布实验中用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂染色,由于甲基绿和吡罗红与DNA、RNA的亲和力不一样,呈绿色的是DNA,呈红色的是RNA,我们很容易用显微镜观察到DNA、RNA主要分布在那里?里面强调的是用甲基绿和吡罗红混合染色剂,所以隐含的意思是不能单独使用一种染色剂,要是单独用甲基绿染色就会把RNA染成绿色。 DNA粗提取与鉴定这个实验,DNA鉴定则换成用二苯胺,在这个DNA粗提取过程中,用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开,用冷酒精处理进一步将DNA与RNA、蛋白质分开。一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA,最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA,所以此时用甲基绿鉴定DNA、RNA都被染成绿色,所以不能说绿色一定是DNA拍卖公司而改用二苯胺就不一样了,DNA和二苯胺反应的产物成蓝色,RNA则没有这种颜色反应。所以用二苯胺鉴定呈蓝色的一定是DNA,并且蓝色深浅与DNA含量高低有关。

1、二苯胺与甲基绿能否混用

这是用于鉴定DNA的存在的两种试剂,二苯胺加热法中,呈现蓝色反应。用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上,呈蓝绿色反应。只用一种即可,不混合用。前者要加热,后者不加热。

2、两者都可以和DNA反应,应该怎样区分它们呢

甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色

3、DNA的鉴定→DNA的鉴定可用二苯胺法,DNA遇到二苯胺变为蓝色;还可以用“甲基绿”法,“甲基绿”使DNA变为蓝绿色。

用“甲基绿”法鉴别DNA时,可将“甲基绿”直接滴到玻璃棒的丝状物上后,要用水充分冲洗掉浮色后再观察。

配制二苯胺试剂→取0.1毫升B液,滴入到10毫升A液中,混匀。⑦鉴定→取4毫升DNA提取液放入试管中,加入4毫升二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100°)加热10分钟。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。

【扩展阅读篇】

1. [comment]∶评论的话   2. [expository notes]∶含有说明、解释或评论的话;作说明或讲解用的话   偶尔有对正文的讲解和带解释性的注,但无评语   3   对某人的看法与对这人的感觉   详细解释      评论的话。   清 唐鉴 《廪贡生王府君墓志铭》:“昔年官京师,阅 倭艮峯 日记,见其上方评语,有曰‘子 涵 子 洁 ’者,问之,则其 河南 同志 王检心 、 王涤心 也。”《二十年目睹之怪现状》第一回:“就将这本册子的记载,改做了小说体裁,剖作若干回,加了些评语。” 赵树理 《三里湾·决心》:“ 玉生 一时想不出适当的评语来,只笼统地说:‘我觉着你各方面都很好!’” 编辑本段评语范文  X同学是个文静懂事的女孩,踏实、稳重、有礼貌,时刻起着模范带头作用,给同学们作出表率。上课时用心听讲的神情,让人感到你的专注、认真。你的作业干净整洁、字迹又漂亮,令老师感到非常满意。你思维灵活,接受能力较强,勤于思考,大胆质疑。你的学习成绩一直都很好,在班里是一个的好女生。愿你永远健康、漂亮、快乐、上进,在知识的海洋里遨游,做一个强者、胜利者!你的聪明加上勤奋好学会令你成功,老师深深地祝福你[1]。

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